操作elisa試劑盒，說簡單又簡單，說復雜又復雜。雖然很多步驟都是由機器完成，但是還有例如加樣，洗板，甩板等需要手工完成的工作。哪一步對你來說，又愛又恨，咬牙切齒呢？

ELISA測定現通常為采用手工操縱的以微孔板條為固相的測定模式，測定操縱非常簡單，一般涉及到標本的收集保存、試劑預備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結果判定和結果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當都會影響測定結果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。

    加血清樣本及反應試劑

    在現在的ELISA商品試劑盒中，血清樣本的加進幾乎是惟一的要使用微量加樣器加進樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須留意的關鍵點是，加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的正確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產生污染。出現氣泡則反應液界面有差異。試劑的加進在國產試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要留意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很輕易出現重復滴加或加在兩孑L之間的現象，這樣就會在孔內的非包被區出現非特異吸附，從而引起非特異顯色。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

    溫育

    溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結合，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。zui為常用的溫育溫度有37~C和室溫，其次是43~C和2～8~C。

    溫育這一步是ELISA測定中zui輕易出現題目的步驟。目前國內通常ELISA商品試劑盒的反應溫育時間為37℃ 0．5～lh，進口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1～2h。一般來說抗原抗體反應在37℃下需要1～2h才能有較*的結合，低于1h，可能會影響測定下限。